ככל שעולים באבולוציה עולה הקושי בסריקת מוטציות וזאת משום שרמת המורכבות של האוגניזם עולה ומספרו יורד. כך לדוגמא בעוד שבתרבית חיידקים ישנם לפחות 107 חיידקים ,במידה ונרצה לחקור קופים, אין בכל העולם 107 קופים.
איך נבודד מוטציה רגילה בחיידק?
ניקח שני סוגי חיידקים:
1.
Auxotrophs -
חיידק שאינו יכול לגדול ללא חומר מסוים המסופק מבחוץ (לדוגמה: אינם יכולים לייצר Leucine,
ולכן חייבים את החומצה האמינית הזו על המצע כדי לגדול).
2.
Prototroph -
מסוגל לגדול גם ללא החומר. במצע הכולל את שני סוגי החיידקים, ה-Prototrophs
מייצרים מספיק מהחומר כדי לאפשר ל-Auxotrophs לחיות אך לא לגדול.
בנוסף נצטרך דרך מסוימת לסנן את החיידקים ה-wildtype (ה-Prototrophs)
מהחיידקים המוטנטיים. בדוגמה זו נניח שחיידקי w.t.
גדלים באופן אפקטיבי יותר, ולכן הם גדולים יותר מהמוטנטיים. על כן נוכל לסנן אותם
באופן פיזי אחד מהשני, ואת החיידקים המוטנטיים נגדל בצלחת אידיאלית (הכוללת Leucine).
בשלב זה נקבל רק מושבות של חיידקים שלא מייצרים Leucine,
ונוכל לחקור כל מושבה באופן ספציפי כדי לגלות איזה מוטציה גרמה לבעיה בייצור.
איך נבודד מוטצית reverse
בחיידק?
נגדל אוכלוסיית Auxotrophs שאינה מייצרת Adenine על
מצע אידיאלי (הכולל Adenine), ונחפש פרטים שעברו מוטציה רברטנטית (Revertants) -
מוטציה שהחזירה אותם למצב w.t..
נכניס את כל הפרטים לצלחת מינימל (שאינה כוללת Adenine),
והחיידקים היחידים שיתפתחו יהיו אלה שעברו מוטציה רברטנטית.
גם כאן נצטרך לחקור כל מושבה בנפרד כדי לבדוק מהי המוטציה
שהחזירה את היכולת.
